琼脂糖凝胶浓度怎么选：分离范围对照

琼脂糖凝胶由加热溶解后冷却的琼脂糖形成三维网状结构，孔径大小由浓度决定。核酸分子带负电，在电场中向正极迁移，片段越小越容易被网孔筛过、跑得越快，这就是分子筛效应。

一、浓度与可分离片段范围的对照

• 1、0.6%：适合 5–20 kb 的大片段，孔径大、大分子也能挤过去。
• 2、1.0%：适合 1–10 kb 的常规片段，是 PCR 产物和质粒检测的通用浓度。
• 3、1.2%：适合 0.5–6 kb 的中短片段，分辨力比 1.0% 更细。
• 4、1.5%–2.0%：适合 0.1–0.5 kb 的小片段，孔径小，短片段之间也能分开。

二、配胶与选浓度的几个要点

• 1、浓度按预期片段大小反过来定：片段越大浓度越低，片段越小浓度越高。
• 2、加热溶解要彻底。琼脂糖完全溶解后溶液应清澈无颗粒，局部未溶的颗粒会让条带背景变脏。
• 3、加核酸染料的时机有讲究：待胶液冷却到约 55–60 ℃再加入并混匀，温度过高会让染料分解，过低则胶液已经开始凝固。
• 4、凝胶浓度也与电压配合。高浓度胶电阻大，电压应相应压低，否则发热加剧、条带变形。